La sélection clonale

L’Institut Français de la Vigne et du Vin (IFV) émane de la fusion entre les deux instituts de la fi lière viti-vinicole, ENTAV et ITV France. Conformément à l’arrêté interministériel du 12 mars 2007, ce centre technique industriel a pour mission de conduire des études de portée générale et des programmes de recherche appliquée pour l’ensemble de la fi lière viti-vinicole, dans les domaines de la sélection variétale, de la viticulture, de la vinifi cation et de la mise en marché des produits. Deux types d’actions sont mis en œuvre : un programme national de maîtrise de la qualité tout au long de la chaîne de production/transformation dans le respect de l’environnement, et des programmes régionalisés prenant en considération les techniques particulières et les intérêts propres de chaque bassin viticole.

Le Pôle Matériel végétal – Domaine de l’Espiguette

La sélection clonale est réalisée selon une procédure précise faisant appel à un savoir-faire et à des techniques qui ont été développés à l’ENTAV depuis 1962 et qui continuent de l’être par l’IFV et ses partenaires. Les principaux objectifs sont d’améliorer le potentiel du matériel végétal viticole tout en maintenant l’ensemble des caractéristiques et l’identité de chaque variété. L’IFV contribue également à la préservation du patrimoine viticole français à travers la mise en place des conservatoires régionaux. Cette activité constitue un véritable maillon entre la recherche et la production dont l’originalité repose sur sa structure, ses opérations et ses résultats. Le Pôle Matériel végétal de l’IFV est situé sur le Domaine de l’Espiguette, occupant 80 hectares sur la commune du Grau du Roi dans le Gard. Ce site a été choisi pour héberger le conservatoire national des clones car les sols sont constitués de sables purs du littoral méditerranéen, ne contenant ni phylloxéra ni nématodes ectoparasites vecteurs du court-noué. Plus de 38 ha sont plantés en collections de clones et parcelles de prémultiplication auxquels s’ajoutent les pépinières.

L’INRA

Cet Institut a joué un rôle important dans la mise en place de la sélection clonale en France, en établissant les bases méthodologiques, tant génétiques que sanitaires, qui sont utilisées actuellement. Les stations d’amélioration d’Angers, Bordeaux, Colmar et Montpellier notamment ont conduit des programmes de sélection clonale pour un grand nombre de variétés. Récemment, afi n de concentrer son activité de sélection sur la création variétale, l’INRA a transféré la sélection clonale à des organismes professionnels appartenant au réseau de partenaires coordonné par l’IFV. Cela passe par l’instauration de plateformes (PTIV) s’appuyant sur l’infrastructure des Unités Expérimentales de l’INRA et sur son expertise dans le domaine des conservatoires génétiques des cépages qu’il maintient. L’étude des maladies virales est assurée par l’INRA de Colmar, qui mène des recherches notamment dans les domaines de la transmission des principales viroses et de l’amélioration de leur diagnostic pour la certifi cation. Les clones agréés qui ont été sélectionnés par l’INRA sont intégrés dans le dispositif national de diffusion confi é au pôle matériel végétal de l’IFV.

Un clone est la descendance végétative conforme à une souche choisie pour son identité indiscutable, ses caractères phénotypiques et son état sanitaire.

La sélection clonale est un processus long. Depuis les prospections menées dans des vieilles parcelles ou la présélection dans des conservatoires régionaux, jusqu’à l’agrément d’un clone et sa multiplication, il se passe en moyenne 15 ans. En effet, les programmes de sélection sanitaire et de sélection génétique nécessitent plusieurs années d’analyses et d’observations avant de pouvoir demander l’agrément à la section vigne du Comité Technique Permanent de la Sélection des plantes cultivées (CTPS). Elle est réalisée selon le schéma page suivante.

Sélection sanitaire

Les techniques de diagnostic utilisées pour le dépistage, ont évolué dans le temps en fonction des connaissances acquises sur les maladies à virus et du développement des méthodes et des outils de diagnostic. Dans un premier temps, le choix au vignoble des souches têtes de clones vise à éliminer les sujets présentant des symptômes visuels de viroses. Par la suite, le dépistage des viroses fait appel à différentes techniques.

Les techniques utilisées actuellement sont :

• L’indexage par greffage ligneux qui consiste à placer un greffon du clone à tester sur une bouture - dont un des bourgeons est conservé – d’une variété qui exprime et montre facilement les symptômes spécifi ques de la virose recherchée (variété indicatrice).
• L’indexage par greffage herbacé qui repose sur le même principe mais fait appel à la méthode de la greffe bouture herbacée ce qui permet une apparition des symptômes plus rapide en serre.
• Le test ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) est une technique sérologique basée sur la réaction anticorps (sérum) – antigène (virus). La préparation des anticorps nécessite la purifi cation du virus si celui-ci est identifi é, ce qui n’est pas le cas pour toutes les maladies en cause. L’adjonction d’une enzyme aux anticorps permet de révéler la présence du virus par une réaction colorée si celui-ci est présent dans l’échantillon à tester. L’intensité de la coloration est mesurée par un spectrophotomètre et la densité optique ainsi obtenue de l’échantillon analysé est comparée à celle d’un échantillon témoin sain et à celle d’un échantillon témoin malade. Le test ELISA est une méthode rapide qui permet de réaliser un premier tri et d’éliminer les accessions infectées par les principales viroses (court-noué et enroulement). Les indexages ne sont alors réalisés que sur les têtes de clones ayant réagi négativement aux tests ELISA. Cette technique est également utilisée pour les analyses de vérifi cation.

Le test RT-PCR (Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction) est une technique génomique qui permet, à partir de l’ARN du virus, d’amplifier à l’aide d’amorces spécifi ques un fragment d’ADN obtenu par retro-transcription. Cette technique complémentaire utilisée ponctuellement, n’est pas encore développée en routine en France.

L’arrêté du 20 septembre 2006 relatif à la sélection, à la production, à la circulation et à la distribution des matériels de multiplication végétative de la vigne précise notamment que :

“…les vignes-mères destinées à la production de matériel de multiplication initial sont exemptes des organismes nuisibles suivants :

• complexe de la dégénérescence infectieuse : virus du court-noué (ou des feuilles en palmette) de la vigne (GFLV) et virus de la mosaïque de l’arabette (ArMV)
• maladie de l’enroulement de la vigne : types 1 (GLRaV-1) et 3 (GLRaV-3) du virus associé à la maladie de l’enroulement de la vigne ;
• virus de la marbrure (GFkV), uniquement pour les porte-greffes.

Caractéristiques succinctes des viroses dépistées

Tous les virus sont des parasites obligatoires contre lesquels il n’existe pas de méthode de lutte directe. De plus, aucune variété cultivée de vigne n’est résistante aux viroses connues. La sélection sanitaire et le contrôle des vecteurs naturels des virus sont aujourd’hui les seules stratégies qui permettent de réduire la propagation des viroses. Des clones infectés par des virus peuvent être assainis par thermothérapie et/ou culture in vitro d’apex ou de méristème.

Des agents pathogènes autres que des virus peuvent également être disséminés par les bois et plants de vignes : bactéries et phytoplasmes par exemple. Les phytoplasmes responsables de la fl avescence dorée (FD) ou du bois noir (BN) sont éliminés par immersion des boutures ou des greffés-soudés dans l’eau chaude (45 min à 50°C). Le traitement à l’eau chaude a également une action sur les bactéries responsables de la nécrose bactérienne (Xylophilus ampelinus), du broussin (Agrobacterium vitis) et de la maladie de Pierce (Xylella fastidiosa).

Le maintien du bon état sanitaire des clones sélectionnés, tout au long de la fi lière de propagation du matériel est essentiel. Cette exigence est satisfaite à la fois :

Sélection génétique

La sélection génétique représente l’autre volet de la sélection clonale, cette procédure est obligatoire et complémentaire de la sélection sanitaire. La sélection génétique se réalise en cinq étapes, effectuées à la fois au Domaine de l’Espiguette et dans la région d’origine de la variété, en collaboration avec les partenaires de l’IFV. Le protocole d’expérimentation des clones de vigne, approuvé par la section vigne du CTPS en 1998, défi nit les conditions d’acquisitions des références agronomiques et technologiques.

Etape 1. Prospections dans des vieilles parcelles de vigne ou présélection dans des conservatoires de clones

Cette toute première étape consiste en la sélection et la description ampélographique de souches choisies pour leurs caractéristiques. Ces observations sont réalisées du printemps jusqu’aux vendanges. Durant l’hiver, les sarments des souches marquées sont prélevés et sont ensuite introduits au Domaine de l’Espiguette.

Etape 3. Collection d’étude

Il s’agit d’une parcelle expérimentale dont l’objectif est l’évaluation des clones issus de prospections ou de conservatoires en vue de leur éventuel agrément. Installée suivant un protocole très précis, elle n’est composée que de clones ayant satisfait aux tests sanitaires vis à vis du court-noué et de l’enroulement. Les conditions sont les suivantes :

• sol homogène et terroir traditionnel pour la variété à étudier, présence d’au moins un clone certifi é témoin et d’un nombre maximum de 20 clones candidats
• suivi viticole de 5 années pour défi nir le profi l viticole du ou des clone(s) candidat(s),
• vinifi cations et dégustations d’au moins 3 millésimes pour évaluer le potentiel technologique et organoleptique du ou des clone(s) candidat(s).

Etape 4. Analyse de l’ensemble des données et demande d’agrément

Après analyse et synthèse des données viticoles et œnologiques et de l’état sanitaire des clones candidats et après consultation de ses partenaires, l’IFV demande l’agrément des clones jugés intéressants. C’est la section vigne du CTPS qui examine les propositions d’agrément que font les établissements de sélection IFV et INRA. La section vigne rend un avis qui est ensuite entériné par le Ministère de l’Agriculture. VINIFLHOR attribue alors un numéro offi ciel au clone nouvellement agréé.

Etape 5. Parcelles de comportement

Il s’agit de parcelles dont l’objet est l’étude de clones agréés, dans un site donné, en vue de comparer leurs caractéristiques culturales et les aptitudes technologiques et organoleptiques de leur produit, en fonction des facteurs du milieu. Les données obtenues à partir du suivi de ces parcelles sont utilisées afi n de conseiller les viticulteurs de la région considérée.